1. مناسب cryopreservation ٹیوب کا انتخاب کیسے کریں۔
1. مواد
ہم سب جانتے ہیں کہ cryopreservation ٹیوبیں بنیادی طور پر کم درجہ حرارت کی نقل و حمل اور ٹشو یا سیل کے نمونوں کو ذخیرہ کرنے کے لیے استعمال ہوتی ہیں، اور عام طور پر حیاتیاتی تحقیق اور طبی شعبوں میں استعمال ہوتی ہیں۔ چونکہ کریووئل نمونے کے ساتھ براہ راست رابطے میں ہے، اس لیے پہلا قدم صحیح مواد کا انتخاب کرنا ہے تاکہ مواد کے ذریعے نمونے کی آلودگی سے بچا جا سکے۔
عام طور پر، cryovials غیر سائٹوٹوکسک مواد سے بنا رہے ہیں. لیبارٹریوں میں عام استعمال ہونے والے مواد میں پلاسٹک اور شیشہ شامل ہیں۔ تاہم، چونکہ شیشے کے کریوویئلز کو تیز رفتار یا الٹرا سینٹرفیوجز میں استعمال نہیں کیا جا سکتا، اس لیے پلاسٹک کے کریوویئل استعمال کیے جاتے ہیں۔ مزید۔
بہت سے پلاسٹک مواد ہیں، کس طرح منتخب کرنے کے لئے؟
پانچ الفاظ، آنکھیں بند کرکے "پولی پروپیلین مواد" کا انتخاب کریں!
پولی پروپیلین میں بہت اچھی کیمیائی اور درجہ حرارت کی استحکام ہے اور یہ مائع نائٹروجن کی گیسی حالت میں منفی 187 ڈگری تک کم درجہ حرارت کو برداشت کر سکتی ہے۔
2. ترکیب
Cryopreservation vials عام طور پر ایک ٹوپی اور ایک ٹیوب باڈی پر مشتمل ہوتے ہیں، اور ان کو اندرونی سکرو کیپ اور بیرونی سکرو کیپ cryovials میں تقسیم کیا جاتا ہے۔ اگر نمونے کو مائع نائٹروجن کے بخارات کے مرحلے میں ذخیرہ کرنا ہے، تو سیلیکا جیل پیڈ کے ساتھ اندرونی گردش کرائیو پریزرویشن ٹیوب استعمال کریں۔ اگر نمونے کو مکینیکل ڈیوائس، جیسے کہ ریفریجریٹر میں ذخیرہ کرنا ہے، تو بیرونی گردش کرائیو پریزرویشن ٹیوب استعمال کریں، عام طور پر بغیر سلیکا جیل پیڈ کے۔
عام طور پر، اندرونی گردش کریووئلز کی کم درجہ حرارت کی مزاحمت بیرونی گردش کریوویئلز سے بہتر ہے۔ مخصوص انتخاب حقیقی ضروریات پر مبنی ہونا چاہیے۔
3. وضاحتیں
تجرباتی تقاضوں کے مطابق، کریووئلز میں عام طور پر {{0}}.5ml، 10ml، 1.5ml، 1.8ml، 2.0ml، 4ml، 5ml، 7ml، اور 10ml جیسی خصوصیات ہوتی ہیں۔
حیاتیاتی نمونوں کے لیے عام طور پر استعمال ہونے والی کریوپریزرویشن ٹیوبیں عموماً 2 ملی لیٹر سائز کی ہوتی ہیں۔ واضح رہے کہ نمونے کا حجم عام طور پر کریوپریزرویشن ٹیوب کے حجم کے دو تہائی سے زیادہ نہیں ہو سکتا، اس لیے مناسب انتخاب منجمد نمونے کے سائز پر مبنی ہونا چاہیے۔ cryovials کے.
2. cryopreservation ٹیوبوں کا استعمال
کرائیوٹوبس دیگر ری ایجنٹس جیسے سیرم، کلچر میڈیا، خلیات اور بافتوں کے تحفظ اور کرائیوجینک ذخیرہ کرنے کے لیے موزوں ہیں۔ انہیں نہ صرف خلیات کو منجمد کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے بلکہ بیکٹیریل تناؤ کو منجمد کرنے کے لیے بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔ خلیوں کو منجمد کرنے اور بیکٹیریل تناؤ کے طریقے مختلف ہیں۔
1. Cryopreserved خلیات
سیل cryopreservation کے لیے عمومی اقدامات:
① cryopreservation سلوشن تیار کریں: سیل cryopreservation سلوشن تیار کریں جس میں 10%-20% ہو۔ عام طور پر استعمال ہونے والے سیل کریوپریزرویشن سلوشنز میں گلیسرول، ڈی ایم ایس او، ایف بی ایس وغیرہ شامل ہیں۔ مخصوص فارمولے کو تجرباتی ضروریات کے مطابق ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔
②خلیات کو تیار کریں: خلیات کو 80%-90% کی کثافت پر کلچر کریں، خلیات کی کٹائی کریں، اور سیل کا ملبہ اور فضلہ ہٹانے کے لیے انہیں PBS یا دیگر بفرز سے 1-2 بار دھوئیں۔
③ سیل سسپنشن تیار کریں: مناسب مقدار میں کرائیو پریزرویشن سلوشن شامل کریں، سیل سسپنشن میں سیلز کو معطل کریں، اور انہیں کریوویئلز یا دیگر کرائیو پریزرویشن کنٹینرز میں یکساں طور پر تقسیم کریں۔
④سلو کولنگ: سیل کریوپریزرویشن ٹیوبیں یا دیگر کنٹینرز رکھیں اور آہستہ آہستہ آئسوتھرملی طور پر -20 ڈگری پر ٹھنڈا کریں، تاکہ سیل آہستہ آہستہ -80 ڈگری سے نیچے ٹھنڈا ہو جائیں۔
⑤فوری منجمد: سیل کریوپریزرویشن ٹیوب یا دیگر کنٹینر رکھیں اور اسے مائع نائٹروجن سے بھرے کنٹینر میں جلدی سے منجمد کریں تاکہ خلیات کو بہت تیزی سے -196 ڈگری سے نیچے ٹھنڈا کیا جا سکے۔
⑥ذخیرہ: سیل کریووئلز یا دیگر کنٹینرز کو مائع نائٹروجن میں اس وقت تک ذخیرہ کریں جب تک کہ پگھلا نہ جائے اور ضرورت پڑنے پر بحال ہوجائے۔
2. کریو پروسیورڈ اسٹرینز
بیکٹیریل تناؤ کو منجمد کرنے کے بہت سے طریقے ہیں۔ یہاں ہم صرف وہ طریقہ متعارف کراتے ہیں جس میں کریوپریزرویشن ٹیوبیں استعمال ہوتی ہیں۔
چینی مٹی کے برتن کی مالا cryopreservation طریقہ
چینی مٹی کے برتن کی مالا کریوپریزرویشن ٹیوب میں 12 فراسٹڈ چینی مٹی کے برتن موتیوں اور تناؤ کے تحفظ کا محلول ہوتا ہے۔ لوگاریتھمک نمو کے مرحلے میں تناؤ کو چنیں اور انہیں کریوپریزرویشن ٹیوب میں منتقل کریں، انہیں الٹا کر کے مکس کریں۔ اس وقت، تناؤ کو تحفظ کے حل میں یکساں طور پر تقسیم کیا جائے گا۔ تحفظ کے محلول کو چوسنے کے لیے پائپیٹ کا استعمال کریں۔ اس وقت، سطح کے تناؤ کی کارروائی کے تحت، ہر چینی مٹی کے برتن کی مالا کی سطح کو تحفظ کے محلول کی ایک تہہ سے ڈھانپ دیا جائے گا، اور بیکٹیریا تحفظ کے محلول کی اس تہہ میں محفوظ ہیں۔ بیکٹیریا پر مشتمل کریوپریزرویشن ٹیوب کو طویل مدتی منجمد کرنے کے لیے -80 ڈگری کے ریفریجریٹر میں منتقل کریں (عام طور پر، اسے تقریباً 1 سال تک ذخیرہ کیا جا سکتا ہے)۔
جب آپ کو سٹرین استعمال کرنے کی ضرورت ہو تو، -80 ڈگری کے ریفریجریٹر سے کرائیوئل نکالیں، چینی مٹی کے برتن کے موتیوں کو منتشر کرنے کے لیے اسے ہلکے سے ہلائیں، ایک چینی مٹی کے برتن کی مالا چنیں اور اسے اسٹریک کلچر کے لیے کلچر میڈیم پلیٹ پر ٹیکہ لگائیں، یا اسے ٹیکہ لگائیں۔ مائع کلچر میڈیم میں۔ ہلانے والے بیکٹیریا کلچر کو انجام دیا گیا۔ ٹیکہ لگانے کے مکمل ہونے کے بعد، کریووئلز کو جلدی سے فریج میں واپس کریں۔
گلیسرین بیکٹیریا کے تحفظ کا طریقہ
یہ طریقہ بیکٹیریل تناؤ کے درمیانی اور طویل مدتی تحفظ کے لیے موزوں ہے، اور تحفظ کا وقت 1 سال سے زیادہ ہو سکتا ہے۔ چونکہ گلیسرین بذات خود بہت چپچپا ہے اور اس کی مقدار درست کرنا مشکل ہے، اس لیے گلیسرول اور فزیولوجیکل نمکین کو عام طور پر 1:1 کے تناسب میں تیار کیا جاتا ہے تاکہ 50% کی حتمی حراستی کے ساتھ گلیسرول کا محلول بنایا جا سکے۔ استعمال کرتے وقت، 50% گلیسرول: بیکٹیریل مائع=1:1 کے تناسب سے مکس کریں، تاکہ گلیسرول کی آخری ارتکاز 20-30% ہو۔ بہت زیادہ یا بہت کم گلیسرول کا ارتکاز بیکٹیریل تناؤ کے تحفظ کے لیے موزوں نہیں ہے۔ طویل مدتی اسٹوریج کے لیے گلیسرول کلچر کو -80 ڈگری کے ریفریجریٹر میں منتقل کریں۔ جب تناؤ کو بازیافت کرنے کی ضرورت ہو تو، کرائیو پریزرویشن ٹیوب کو 37 ڈگری کے پانی کے غسل میں رکھیں جب تک کہ تناؤ مکمل طور پر پگھل نہ جائے۔ اس وقت، تناؤ کو تجربات کے لیے نکالا جا سکتا ہے۔ اس طریقہ کار میں چینی مٹی کے برتن کی موتیوں کی ضرورت نہیں ہے، لہذا عام کریوویئلز کام کر سکتے ہیں۔
جین یو کریوٹیوب
مواد:
ٹوپی اور جسم اعلی معیار کے پولی پروپیلین سے بنے ہیں۔
خصوصیات:
*کیپ اور ٹیوب باڈی دونوں ایک ہی بیچ اور ماڈل کے اعلیٰ معیار کے پولی پروپیلین مواد سے بنے ہیں، جس میں اچھی کیمیائی مزاحمت اور اعلی درجہ حرارت کی مزاحمت ہے۔ ایک ہی توسیعی گتانک کسی بھی درجہ حرارت پر اچھی سگ ماہی کو یقینی بناتا ہے۔
*خود کھڑا ڈیزائن، آسان انتظام، فریزر کی جگہ کی موثر بچت
*بیرونی اسکرو کیپ کا واضح پیٹرن ڈیزائن رگڑ کو بڑھاتا ہے، جلد کھولنے اور بند کرنے میں سہولت فراہم کرتا ہے، اور پروسیس شدہ نمونوں کے آلودگی کے امکانات کو کم کرتا ہے۔ یہ خاص طور پر منجمد نمونوں کے لیے ڈیزائن کیا گیا ہے۔
*ٹیوب کی دیوار کے نچلے حصے کا بہترین ڈیزائن نمونے کو ہٹانا آسان بناتا ہے اور باقیات کو کم کرتا ہے۔
*کم ترین درجہ حرارت -196 ڈگری سیلسیس کو برداشت کر سکتا ہے، ٹیوب باڈی انتہائی شفاف ہے، جس سے نمونے کا مشاہدہ کرنا آسان ہو جاتا ہے۔
*ٹیوب باڈی میں تجرباتی عمل کی ریکارڈنگ کو آسان بنانے کے لیے اسکیل لائنز اور خالی تحریری جگہ ہوتی ہے۔
*گیما رے شعاع ریزی سے جراثیم سے پاک، DNase/RNase فری، پائروجن فری، اینڈوٹوکسین سے پاک